愁眉苦脸打一生肖，答案是牛。
理由如下：
形象特征：牛常常被描绘为勤劳而辛苦的动物，其表情往往显得没有精神，这与“愁眉苦脸”的形象相吻合。在人们的印象中，牛总是默默无闻地耕耘，承担着繁重的劳动，这种形象与“愁眉苦脸”所表达的辛劳与无奈相呼应。
生肖寓意：在十二生肖中，牛是勤劳和坚韧的象征。属牛的人通常具有谨慎小心、脚踏实地、有耐性以及肯上进的特点。他们温厚老实，是天生的保守者，尊重传统，重视工作与家庭。这种性格特质也与“愁眉苦脸”背后所蕴含的辛勤付出和对生活的坚持相呼应。
文化内涵：在中国传统文化中，牛是农业社会的重要劳动力，象征着勤劳和奉献。因此，“愁眉苦脸打一生肖是牛”这一谜语不仅形象地描绘了牛的外貌特征，还深刻体现了牛在中国文化中的象征意义。
综上所述，从形象特征、生肖寓意以及文化内涵等方面来看，“愁眉苦脸”这一谜语所指的生肖无疑是牛。
