在《穿越火线》的生化模式中，E键和G键为玩家提供了不同的功能。E键的功能是吸取经验。幽灵玩家可以对准已经死亡的幽灵头部使用E键，吸取其经验值，从而快速提升自己的等级。G键则用于使用特殊技能。不同类型的幽灵使用G键后，可以激活特定的能力，如爆速、防御圈（终结者）、扔雷（灵魂忍者）等。在生化模式中，玩家的角色可能会被感染成为不同类型的生化幽灵。每种生化幽灵都有其独特的特点和技能。例如，红色生化幽灵因实验失控而变异，失去了意志，开始攻击人类。绿巨人则是因为受到辐射影响而产生的变种，拥有强大的体魄和速度。疯狂宝贝原是护士，被感染后通过药物变异，拥有超强跳跃能力和隐身技能。迷雾幽灵身份神秘，能释放黑雾遮蔽视线。灵魂忍者则因保护村民被感染，擅长潜行和投掷击退手雷。终结者是在核电站事件中变异，能产生能量护盾。在游戏中，玩家需要通过感染人类或互相攻击来积累经验，进化成更强大的生化幽灵。游戏的胜负取决于规定时间内是否所有的佣兵被感染或是否能消灭所有的生化幽灵。
